TEKNIK BEKERJA SECARA ASEPTIK (PENUANGAN MEDIA DAN PEMINDAHAN ATAU ISOLASI KULTUR MIKROBA)

I.  PENDAHULUAN

1.1  Latar Belakang

Mikroorganisme merupakan makhluk hidup yang berukuran mikroskopis, kebanyakan terdiri dari makhluk hidup bersel tunggal. Dalam ilmu mikrobiologi, pengertian mikroorganisme kebanyakan pada kelompok virus, bakteri, jamur atau kapang. Mikroorganisme ini tersebar luas di alam baik di udara, air dan di dalam tanah. Peranan mikroorganisme di alam terutama adalah sebagai decomposer (pengurai) bahan-bahan organik.
Selain dikenal sebagai makhluk yang mendatangkan kerugian (misal: penyebab penyakit, merusak bahan makanan dan penyebab keracunan) terutama dari jenis bakteri, kapang/jamur dan ragi/khamir ternyata juga mempunyai banyak keuntungan bagi manusia.

Pada saat melakukan percobaan agar memperoleh hasil yang diharapkan dan sesuai dengan tujuan praktikum dibutuhkan ketelitian dan mengurangi faktor-faktor yang dapat menyebabkan kegagalan dalam praktikum, salah satu factor kegagalan pada saat percobaan dalam media kultur di butuhkan keadaan yang steril dan dibutuhkan keterampilan dalam menggunakan dan tatacara dalam prosedur yang telah dibuat sebelum pratik agar hasil yang di dapat sesuai dengan yang harus di capai.

Dalam bagian ini kita akan mencoba lebih memahami suatu proses dalam praktikum yaitu suatu proses teknik berkerja secara aseptik,yang diantaranya mencakup ; penuangan media,pemindahan dan isolasi kultur mikroba. Pada saat melakukan praktikum.Untuk dapat lebih memahami dan mengerti mengenai cara berkerja secara aseptik ini maka dalam bagian ini akan kita bahas dan mempraktikan langsung sesuai prosedur yang telah di buat, yang akan dapat menuntun para praktikan dalam langkah-langkah awal berkerja dari sini dapat kita uraikan dan kita jabarkan.

Adapun tujuan dari dilakukannya praktikum ini adalah sebagai berikut:

Melatih mahasiswa berkerja di dalam laboratorium secara aseptik (mensterilkan meja kerja menuangkan media,memipet,mentransfer atau memindahkan kultur/biakan mikroba dari sutu media ke media lain dari suatu wadah ke wadah lain.

II.  METODOLOGI PERCOBAAN

Dalam praktikum kita kali ini terdapat alat yang dibutuhkani adalah jamur tricoderma, jamur kacang tanah, media PDA, PDA, pembakar  bunsen,cawan petri, alcohol 70%, jarum ent dan borgabus,dan erlemeyer.

Pada praktikum kali ini prosedur kerja yang dilakukan adalah sebagai berikut :

2.2.2  Langkah memindah biakan dari cawan cetri ke awan petri lainnya.

1.Pertama  jarum Ose disemprot dengan  alkohol.

2. Setelah jarum ose di panaskan diatas api bunsen hingga membara. Setelah itu diamkan .

3.Selanjutnya  mengambil media yang terdapat di dalam cawan petri. Saat proses pengambilan media dilakukan di dekat api bunsen.

4. Setelah itu cawan petri yang akan digunakan sebagai tempat meletakkan mediayang telah diambil tadi, terlebihdahulu dipanaskan pada apibunsen pada

bagian  pinggir – pinggirnya.

5. Terakhir media dipindahkan, setelah media dipindahkan panaskan kembali cawan petri tersebut. Dan jarum ose yang digunakan dipanaskan juga pada api bunsen.

III.  HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

3.1    Hasil pengamatan                                            

3.2  Pembahasan

Teknik aseptik sangat diperlukan untuk menghindarkan mikroorganisme dari kontaminan yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba. Teknik aseptis digunakan sepanjang kegiatan berlangsung, baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun praktikannya. Untuk alat dan bahan praktikum dapat diterapkan metode sterilitas. Penguasaan teknik aseptik ini sangat diperlukan dalam keberhasilan laboratorium mikrobiologi dan hal tersebut merupakan salah satu metode permulaan yang dipelajari oleh ahli mikrobiologi.

Sementara itu, menurut Pelczar & Chan (2007) teknik aseptis sangat penting dalam pengerjaan mikrobiologi yang memerlukan ketelitian dan keakuratan disamping kesterilan yang harus selalu dijaga agar terbebas dari kontaminan yang dapat mencemari. Populasi mikroba di alam sekitar kita sangat besar dan komplek. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit. Sekali bersin terdapat beribu-ribu mikroorganisme.

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya.

Nutrient Agar (NA) merupakan media yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri, media ini dipanaskan agar mencair, kemudian sedikit didinginkan sehingga suhunya kira-kira 40-50°C, pendinginan ini dilakukan untuk mendapatkan suhu yang ideal sehingga agar tidak mengeras namun tidak terlalu panas yang mengakibatkan kematian koloni yang akan dibiakkan. Kegunaan dari Nutrient Agar adalah untuk kultivasi dan perawatan sebagian besar dari mikroorganisme. Komposisi dari Nutrient Agar adalah agar sebanyak 15 gram, pepton sebanyak 5 gram, NaCl sebanyak 5 gram, ekstrak yeast sebanyak 2 gram dan ekstrak kaldu sebanyak 1 gram (Atlas 1946). Pada praktikum yang dilakukan, meskipun agar sudah didiamkan selama beberapa waktu, agar tetap tidak membeku secara sempurna, hal ini disebabkan karena pada saat pembuatan media Nutrient Agar, larutan Nutrient Agar belum homogen secara sempurna. Sehingga masih ada akuades yang belum tercampur dengan pertikel-pertikel Nutrient Agar.

Golongan bakteri Coli, merupakan jasad di dalam substrat air, bahan makanan, dan sebagainya yang menjadi indikator untuk kehadiran jasad berbahaya, yang mempunyai persamaan sifat. Escherichia sebagai salah satu contoh yang terkenal mempunyai beberapa spesies hidup di dalam saluran pencernaan makanan manusia dan hewan berdarah panas. Escherichia coli mula-mula diisolasi oleh Escherich (1885) dari tinja bayi (Suriawiria 2008).

Bakteri Coli dalam jumlah tertentu di dalam air, dapat digunakan sebagai indikator adanya jasad patogen. Jika di dalam 100 mL air minum terdapat 500 bakteri Coli, memungkinkan terjadinya penyakit gastroenteritis yang segera diikuti oleh demam tifus. Escherichia coli pada keadaan tertentu dapat mengalahkan mekanisme pertahanan tubuh sehingga dapat tinggal di dalam biader (cystitis), pelvis (ginjal), dan hati, yang dapat menyebabkan diare, peritonistis, meningitis, dan infeksi-infeksi lainnya.

Dalam praktikum mikroorganisme terutama berhubungan erat dengan mikroorganisme tentunya perlu suatu perlakuan khusus baik dari langkah awal sampai langkah akhir,dimana langkah awal ini akan menentukan hasil akhir pengamatan, yakni sterilisasi untuk membebaskan alat dan bahan dari mikroba pengganggu. Adapula fungsi dari teknik berkerja secara aseptic  ini adalah:

1. Menghambat  penyebaran penyakit dan infeksi

2. Membrantas organisme yang terinfeksi pada inangnya.

3. Menghindari  pembusukan dan perusakan bahan oleh mikroorganisme.

Mikroba dapat kita kendalikan dengan berbagai cara.semua itu bertujuan untuk meminimalisasi,mengurangi resiko kesalahan data,yang hendak dicapai.          

Ada beberapa cara untuk mengendalikan jumlah populasi mikroorganisme, diantaranya adalah sebagai berikut :
a) Cleaning (kebersihan) dan Sanitasi
Cleaning dan Sanitasi sangat penting di dalam mengurangi jumlah populasi mikroorganisme pada suatu ruang/tempat. Prinsip cleaning dan sanitasi adalah menciptakan lingkungan yang tidak dapat menyediakan sumber nutrisi bagi pertumbuhan mikroba sekaligus membunuh sebagian besar populasi mikroba.
b) Desinfeksi
Adalah proses pengaplikasian bahan kimia (desinfektans) terhadap peralatan, lantai, dinding atau lainnya untuk membunuh sel vegetatif mikrobial. Desinfeksi diaplikasikan pada benda dan hanya berguna untuk membunuh sel vegetatif saja, tidak mampu membunuh spora.
c) Antiseptis
Merupakan aplikasi senyawa kimia yang bersifat antiseptis terhadap tubuh untuk melawan infeksi atau mencegah pertumbuhan mikroorganisme dengan cara menghancurkan atau menghambat aktivitas mikroba.
d)- Sterilisasi
Proses menghancurkan semua jenis kehidupan sehingga menjadi steril. Sterilisasi seringkali dilakukan dengan pengaplikasian udara panas. Ada dua metode yang sering digunakan, yaitu :
1)    Panas lembab dengan uap jenuh bertekanan. Sangat efektif untuk sterilisasi karena menyediakan suhu jauh di atas titik didih, proses cepat, daya tembus kuat dan kelembaban sangat tinggi sehingga mempermudah koagulasi protein sel-sel mikroba yang menyebabkan sel hancur. Suhu efektifnya adalah 121^oC pada tekanan 5 kg/cm² dengan waktu standar 15 menit. Alat yang digunakan : pressure cooker, autoklaf (autoclave) dan retort.
2)    Panas kering, biasanya digunakan untuk mensterilisasi alat-alat laboratorium. Suhu efektifnya adalah 160^oC selama 2 jam. Alat yang digunakan pada umumnya adalah oven.
e) Pengendalian Mikroba dengan Suhu Panas lainnya

a)    Pasteurisasi : Proses pembunuhan mikroba patogen dengan suhu terkendali berdasarkan  waktu kematian termal bagi tipe patogen yang paling resisten untuk dibasmi. Dalam proses pasteurisasi yang terbunuh hanyalah bakteri patogen dan bakteri penyebab kebusukan namun tidak pada bakteri lainnya. Pasteurisasi biasanya dilakukan untuk susu, rum, anggur dan makanan asam lainnya. Suhu pemanasan adalah 65^oC selama 30 menit.
b)    Tyndalisasi : Pemanasan yang dilakukan biasanya pada makanan dan minuman kaleng. Tyndalisasi dapat membunuh sel vegetatif sekaligus spora mikroba tanpa merusak zat-zat yang terkandung di dalam makanan dan minuman yang diproses. Suhu pemanasan adalah 65^oC selama 30 menit dalam waktu tiga hari berturut-turut.
c)     Boiling : Pemanasan dengan cara merebus bahan yang akan disterilkan pada suhu 100^oC selama 10-15 menit. Boiling dapat membunuh sel vegetatif bakteri yang patogen maupun non patogen. Namun spora dan beberapa virus masih dapat hidup. Biasanya dilakukan  pada alat-alat kedokteran gigi, alat suntik, pipet, dll.
d)    Red heating : Pemanasan langsung di atas api bunsen burner (pembakar spiritus) sampai berpijar merah. Biasanya digunakan untuk mensterilkan alat yang sederhana seperti jarum ose.
e)    Flaming : Pembakaran langsung alat-alat laboratorium  diatas pembakar bunsen  dengan alkohol atau spiritus tanpa terjadinya pemijaran.
f)- Pengendalian Mikroba dengan Radiasi
Bakteri terutama bentuk sel vegetatifnya dapat terbunuh dengan penyinaran sinar ultraviolet (UV) dan sinar-sinar ionisasi.
a)    Sinar UV : Bakteri yang berada di udara atau yang berada di lapisan permukaan suatu benda yang terpapar sinar UV akan mati.
b)    Sinar Ionisasi : yang termasuk sinar ionisasi adalah sinar X, sinar alfa, sinar beta dan sinar gamma. Sterilisasi dengan sinar ionisasi memerlukan biaya yang besar dan biasanya hanya digunakan pada industri farmasi maupun industri kedokteran.

-          Sinar X : Daya penetrasi baik namun perlu energi besar.
-          Sinar alfa : Memiliki sifat bakterisidal tetapi tidak memiliki daya penetrasi.
-          Sinar beta : Daya penetrasinya sedikit lebih besar daripada sinar X.
-          Sinar gamma : Kekuatan radiasinya besar dan efektif untuk sterilisasi bahan makanan.
g)- Pengendalian Mikroba dengan Filtrasi
Ada dua filter, yaitu filter bakteriologis dan filter udara.

a)     Filter bakteriologis biasanya digunakan untuk mensterilkan bahan-bahan yang tidak tahan terhadap pemanasan, misalnya larutan gula, serum, antibiotika, antitoksin, dll. Teknik filtrasi prinsipnya menggunakan penyaringan, dimana yang tersaring hanyalah bakteri saja. Diantara jenis filter bakteri yang umum digunakan adalah : Berkefeld (dari fosil diatomae), Chamberland (dari porselen), Seitz (dari asbes) dan seluosa.
b)    Filter udara berefisiensi tinggi untuk menyaring udara berisikan partikel (High Efficiency Particulate Air Filter atau HEPA) memungkinkan dialirkannya udara bersih ke dalam ruang tertutup dengan sistem aliran udara laminar (Laminar Air Flow)
h)- Pengendalian Mikroba dengan Bahan Kimia
Saat ini, telah banyak agen kimia yang berpotensi untuk membunuh atau menghambat mikroba. Penelitian dan penemuan senyawa kimia baru terus berkembang. Agen kimia yang baik adalah yang memiliki kemampuan membunuh mikroba secara cepat dengan dosis yang rendah tanpa merusak bahan atau alat yang didisinfeksi.
Pada prinsipnya, cara kerja agen kimia ini digolongkan menjadi :
a)     Agen kimia yang merusak membran sel mikroba.
b)     Agen kimia yang merusak enzim mikroba.
c)     Agen kimia yang mendenaturasi protein.
Ada beberapa faktor yang mempengaruhi efektivitas agen kimia di dalam mengendalikan mikroba, yaitu :
a)     Konsentrasi agen kimia yang digunakan. Semakin tinggi konsentrasinya maka efektivitasnya semakin meningkat.
b)     Waktu kontak. Semakin lama bahan tersebut kontak dengan bahan yang disterilkan maka hasilnya akan semakin baik.
c)     Sifat dan jenis mikroba. Mikroba yang berkapsul dan berspora lebih resisten dibandingkan yang berkapsul dan berspora.
d)     Adanya bahan organik dan ekstra. Adanya bahan-bahan organik dapat menurunkan efektivitas agen kimia.
e)     pH atau derajat keasaman. Efektivitas bahan kimia dapat berubah  seiring dengan perubahan pH.
a) Agen Kimia yang merusak membran sel
1.     Golongan Surfaktans (Surface Active Agents), yaitu golongan anionik, kationik dan nonionik.
2.     Golongan fenol.
b) Agen Kimia merusak enzim
1.     Golongan logam berat seperti arsen, perak, merkuri, dll.
2.     Golongan oksidator seperti golongan halogen, peroksida hidrogen dan formaldehid.
c) Agen Kimia yang menyebabkan denaturasi protein
Agen kimiawi yang menyebabkan terjadinya koagulasi dan presipitasi protoplasma, seperti alkohol, gliserol dan bahan-bahan asam dan alkalis.

IV.  KESIMPULAN

Adapun beberapa kesimpulan yang dapat ditari dari praktikum ini yakni sebagai berikut:

1.Keterampilan dalam menggunakan media sangat dibutuhkan dalam melakukan percobaan untuk mendapatkan hasil yang ingin di capai.

2.Proses aseptik ini dapat dilakukan dengan cara pemanasan, menggunakan bunsen dan alat yang hendak disterilkan dipanaskan memutar merata.

3.Pada saat proses pemindahan media jamur harus dilakukan secara steril dengan mendekatkan media PDA  dan cawan petri pada bunsen.

4. Jika alat dan bahan yang digunakan tidak steril maka mikroba yang hendak dibiakan akan mengalami kegagalan.

                   

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2006. Pengendalian mikroorganisme. http://rachdie.blogsome.com/2006/10/14/pengendalian-mikroorganisme/. Diakses tanggal 10 april 2013

Pelczar MJ & ECS Chan. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Ratna SiriHadioetomo dkk, penerjemah. Jakarta: UI-Press. Terjemahan dari

    Dasar-Dasar Mikrobiologi 1,Universitas Indonesia Press. Jakarta.

Suriawiria, Unus. 2008. Mikrobiologi Air. Bandung: PT. Alumni.

Machmud, M. 2008. Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman Pangan, Bogor

Oram, R.F. S., Paul. J. Hummer, Jr. 2001. Biology Living System. Glencoe Division Mc Millan Company. Waterville.